HSL CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401341-ACT

ヒトのLIPEは、ジアシルグリセロールなどの脂質エステルを加水分解して細胞内の脂質動員を制御する主要な中性リパーゼであるホルモン感受性リパーゼ（HSL）をコードしている。HSL活性は、cAMP/PKA依存的なリン酸化と脂肪滴ダイナミクスの協調を介して、カテコールアミンおよびインスリンのシグナル伝達を統合し、脂肪細胞やステロイド産生組織におけるエネルギーホメオスタシスを支えている。LIPE/HSLの制御異常は、脂肪分解の破綻、異所性脂質蓄積、ならびにインスリン抵抗性や脂質異常症に関連する代謝表現型と結び付けられており、脂質シグナル伝達と代謝適応を研究するうえで重要な標的となる。さらに、LIPE依存的な脂質フラックスは、脂肪酸の利用可能性や下流の脂質メディエーターの変化を通じて、炎症経路や細胞ストレス応答にも影響し得る。

HSL CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性LIPEの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

HSL CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における LIPE 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はLIPE転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性HSLの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のLIPE遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるHSL依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびLIPE発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるHSL経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。