HSF2 Double Nickase Plasmid (h): sc-402400-NIC

HSF2 (Heat Shock Factor 2) ist ein sequenzspezifischer Transkriptionsfaktor, der die stressabhängige Genexpression koordiniert und zur Proteostase beiträgt, indem er Hitzeschockproteine und Netzwerke molekularer Chaperone reguliert. Über die klassische Hitzeschock-Signalgebung hinaus ist HSF2 an Entwicklungs- und Differenzierungsprogrammen beteiligt, einschließlich neuronaler und Keimzell‑Signalwege, und interagiert mit der Chromatin-Remodellierung, um stimulusabhängige transkriptionelle Outputs zu formen. Die Aktivität von HSF2 kann den Zellzyklusverlauf, die Anfälligkeit für Apoptose und die Reaktionen auf proteotoxischen Stress modulieren und verknüpft ihn damit mit Signalwegen, die für Neurodegeneration, Krebsbiologie und Erkrankungen mit gestörter Proteinhomöostase relevant sind. Fehlregulierte HSF2‑abhängige Transkriptionsprogramme wurden in mehreren krankheitsrelevanten Kontexten beschrieben, was seine Nutzung als mechanistischen Knotenpunkt für die Untersuchung von Stressadaptation und Transkriptionsregulation in menschlichen Zellen unterstützt.

HSF2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HSF2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HSF2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HSF2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HSF2-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.