HSF2 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402400-ACT

Humanes HSF2 (Heat-Shock-Faktor 2) ist ein sequenzspezifischer Transkriptionsfaktor, der Heat-Shock- und Proteostase-Programme koordiniert, indem er die Expression molekularer Chaperone und anderer stressresponsiver Gene reguliert. Es ist an zellulären Signalwegen beteiligt, die die Proteinfaltung, die Proteasomenfunktion und die Anpassung an entwicklungsbedingten und umweltbedingten Stress steuern, mit kontextabhängigen Interaktionen mit anderen Heat-Shock-Faktoren wie HSF1. Die Aktivität von HSF2 wurde mit Differenzierungs- und neuroentwicklungsbezogenen Prozessen in Verbindung gebracht, und eine Fehlregulation von Stressantwort-Transkriptionsnetzwerken unter Beteiligung von HSF2 wird in Krankheitskontexten untersucht, die durch proteotoxischen Stress gekennzeichnet sind, einschließlich der Krebsbiologie und Modellen der Neurodegeneration.

HSF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen HSF2-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

HSF2 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des HSF2-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der HSF2-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen HSF2-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native HSF2-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von HSF2-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des HSF2-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem HSF2-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.