HS6ST1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405111

Übersicht

HS6ST1 kodiert die Heparansulfat-6-O-Sulfotransferase 1, ein im Golgi-Apparat lokalisiertes Enzym, das während der Reifung von Heparansulfat-Proteoglykanen die 6-O-Sulfatierung von Glucosaminresten katalysiert. Diese Modifikation formt Bindungsstellen im Heparansulfat, die Verteilung und Signalstärke zahlreicher Morphogene und Wachstumsfaktoren steuern und dadurch Prozesse wie Rezeptortyrosinkinase-Signalgebung, Zell–Matrix-Interaktionen und die Entwicklungs-Musterbildung beeinflussen. Durch die Feinabstimmung der Heparansulfat-Feinstruktur kann HS6ST1 kontextabhängig Signalwege wie FGF-, WNT-, BMP- und Hedgehog-Signalgebung modulieren. Veränderte Heparansulfat-Sulfatierungsprogramme unter Beteiligung von HS6ST1 wurden mit einer dysregulierten Zellkommunikation in der Krebsbiologie sowie mit neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, was HS6ST1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für mechanistische Studien zur Regulation extrazellulärer Signalübertragung macht.

Das HS6ST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HS6ST1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HS6ST1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HS6ST1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HS6ST1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HS6ST1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HS6ST1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HS6ST1-Exone abzielen, die für die HS6ST1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HS6ST1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HS6ST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HS6ST1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HS6ST1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HS6ST1 HDR-Plasmid (h) und HS6ST1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HS6ST1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HS6ST1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.