Plasmide CRISPR d'Activation (h) HoxD10: sc-403328-ACT

HOXD10 code le facteur de transcription à homéoboîte HoxD10, un régulateur clé de la mise en place de l’axe antéro‑postérieur et de la morphogenèse des membres, qui contribue à établir l’identité cellulaire grâce à une liaison spécifique à l’ADN et au contrôle transcriptionnel. Dans les tissus différenciés, HOXD10 participe à des programmes qui gouvernent la migration et l’adhérence cellulaires ainsi que le remodelage de la matrice extracellulaire, en interaction avec des réseaux transcriptionnels du développement et des voies de signalisation qui orientent l’engagement de lignée. Une expression altérée de HOXD10 ou une perturbation de sa régulation a été associée à des phénotypes oncogéniques, notamment des modifications de l’invasivité et du potentiel métastatique, reflétant son rôle dans le contrôle d’ensembles de gènes liés aux dynamiques épithélio‑mésenchymateuses. En tant que régulateur du développement à activité dépendante du contexte, HOXD10 est fréquemment utilisé pour étudier les circuits transcriptionnels, la régulation de la chromatine et des états d’expression génique pertinents pour la maladie dans des modèles de cellules humaines.

HoxD10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HOXD10 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HoxD10 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HOXD10 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HOXD10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HoxD10. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HOXD10 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HoxD10 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HoxD10 dans les cellules tumorales présentant une expression de HOXD10 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.