Partículas Lentivirales de Activación (m) HoxC10: sc-431637-LAC

Hoxc10 codifica el factor de transcripción homeobox HoxC10, un regulador de unión al ADN que establece el patrón de los tejidos embrionarios posteriores y ayuda a especificar la identidad regional a lo largo del eje anteroposterior. En el ratón, HoxC10 contribuye a las decisiones de linaje y a los programas morfogenéticos integrando señales del desarrollo y coordinando redes transcripcionales que controlan la diferenciación, la migración y la organización tisular. Su actividad se vincula a circuitos reguladores génicos del desarrollo que incluyen otros factores HOX y cofactores que gobiernan el estado de la cromatina y la selección de potenciadores (enhancers). La expresión desregulada de genes HOX, incluidos programas de HOXC10 alterados, se utiliza con frecuencia como lectura molecular en estudios sobre diferenciación aberrante y reprogramación transcripcional oncogénica.

Las partículas de activación lentiviral HoxC10 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Hoxc10 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HoxC10 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Hoxc10, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HoxC10. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Hoxc10 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.