Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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hnRNP E1 Double Nickase Plasmid (m): sc-423930-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das hnRNP E1 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- hnRNP E1 Double-Nickase-Plasmid (m) und hnRNP E1 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Pcbp1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: hnRNP E1: sc-137249
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
hnRNP E1 Double Nickase Plasmid (m) | sc-423930-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
hnRNP E1 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-423930-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das murine Pcbp1 kodiert das heterogene nukleäre Ribonukleoprotein E1 (hnRNP E1), ein RNA-bindendes Protein, das Poly(C)-Motive erkennt, um die Stabilität von mRNA, die Translation und alternative Prozessierung zu steuern. hnRNP E1 ist an posttranskriptionellen regulatorischen Netzwerken beteiligt, die den Zellzyklusverlauf, Differenzierungsprogramme und stressresponsive Genexpression prägen, und kann die RNA-Regulation mit einer signalabhängigen Umgestaltung der Genexpression koppeln. Über seine Rollen bei der Assemblierung von Ribonukleoprotein-Komplexen und der Kontrolle der Translation beeinflusst hnRNP E1 Signalwege, die mit epithelialer Plastizität und Zytoskelettdynamik verknüpft sind. Eine veränderte PCBP1/hnRNP-E1-Aktivität wurde mit einer fehlregulierten RNA-Metabolik in krebsassoziierten Kontexten und anderen Erkrankungen in Verbindung gebracht, in denen die Genauigkeit der RNA-Prozessierung entscheidend ist.
hnRNP E1 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Pcbp1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Pcbp1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Pcbp1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Pcbp1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.