Plásmido CRISPR de Activación (h) hnRNP E1: sc-401557-ACT

PCBP1 codifica la ribonucleoproteína nuclear heterogénea E1 (hnRNP E1), un factor de unión a ARN y ADN que coordina la regulación génica posranscripcional al controlar la estabilidad del ARNm, el empalme (splicing) alternativo, el transporte y la traducción. hnRNP E1 reconoce elementos de secuencia ricos en citosina dentro de los transcritos diana y participa en complejos ribonucleoproteicos que acoplan señales de entrada a una síntesis proteica regulada. A través de estas actividades, PCBP1 contribuye a procesos celulares que incluyen la diferenciación, las respuestas al estrés y el mantenimiento de la homeostasis del proteoma. La alteración de la expresión o la función de PCBP1/hnRNP E1 se ha asociado con programas de expresión génica desregulados observados en la biología del cáncer y en otros trastornos relacionados con un procesamiento aberrante del ARN.

hnRNP E1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PCBP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

hnRNP E1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PCBP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PCBP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de hnRNP E1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PCBP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de hnRNP E1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía hnRNP E1 en células tumorales con expresión de PCBP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.