Particules Lentivirales d'Activation (m) HNF-3β: sc-420890-LAC

Foxa2 code le facteur nucléaire hépatocytaire 3 bêta (HNF-3β), un facteur de transcription de la famille forkhead box qui agit comme facteur pionnier en ouvrant la chromatine et en coordonnant des programmes géniques spécifiques de lignée au cours de la formation de l’endoderme. Au cours du développement chez la souris et dans les tissus adultes, HNF-3β régule des réseaux transcriptionnels qui contrôlent la différenciation hépatique et pancréatique, le métabolisme des acides biliaires et du glucose, ainsi que l’homéostasie épithéliale, via des interactions avec la signalisation des récepteurs nucléaires et d’autres régulateurs transcriptionnels. L’activité de Foxa2 intègre des signaux de patronnement développemental et des voies métaboliques, influençant les décisions d’identité cellulaire et les réponses au stress. La dérégulation des programmes associés à Foxa2 a été reliée à des altérations de la régulation métabolique et à des phénotypes de remodelage tissulaire pertinents pour des modèles de diabète et de maladies hépatiques.

Les particules d'activation lentivirales HNF-3β (m) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Foxa2 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales HNF-3β (m) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Foxa2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de HNF-3β. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Foxa2 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.