Plásmido CRISPR de Activación (h) HMGI-C: sc-401573-ACT

HMGA2 codifica la proteína arquitectónica de la cromatina HMGI-C, una proteína HMG no histónica que se une a ADN rico en AT para modular la organización de los nucleosomas y los programas de transcripción que controlan la proliferación, la diferenciación y los estados tipo célula madre. Participa en redes de remodelación de la cromatina y coopera con vías como la señalización TGF-β/SMAD y la regulación postranscripcional LIN28/let-7 para influir en la transición epitelio‑mesénquima, la progresión del ciclo celular y la temporización del desarrollo. La expresión desregulada de HMGA2 se asocia con paisajes transcripcionales alterados en múltiples contextos tumorales y es una característica recurrente de neoplasias mesenquimales, lo que respalda su amplia relevancia para la transformación oncogénica y la remodelación tisular. Como regulador nuclear con una influencia genómica extensa, HMGA2 se estudia con frecuencia por sus funciones en la organización del genoma, el compromiso de linaje y la cooperatividad con factores de transcripción.

HMGI-C El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HMGA2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HMGI-C El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HMGA2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HMGA2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HMGI-C. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HMGA2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HMGI-C en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HMGI-C en células tumorales con expresión de HMGA2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.