HMGCL Double Nickase Plasmid (h): sc-403841-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HMGCL Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HMGCL Double-Nickase-Plasmid (h) und HMGCL Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HMGCL abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HMGCL: sc-100548
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HMGCL Double Nickase Plasmid (h) | sc-403841-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HMGCL Double Nickase Plasmid (h2) | sc-403841-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HMGCL kodiert die 3‑Hydroxymethyl‑3‑methylglutaryl‑CoA‑Lyase, ein mitochondriales Enzym, das den letzten Schritt der Ketogenese und des Leucinabbaus katalysiert, indem es HMG‑CoA in Acetoacetat und Acetyl‑CoA umwandelt. Diese Aktivität verknüpft den mitochondrialen Umgang mit Acetyl‑CoA mit der zellulären Energiebilanz während des Fastens und anderer metabolischer Belastungen und ist in umfassendere Signal- und Stoffwechselwege eingebunden, die die Fettsäureoxidation, die Anaplerose und die Redoxhomöostase steuern. Eine veränderte HMGCL‑Funktion ist mit angeborenen Stoffwechselstörungen verbunden, die die Ketonkörperproduktion und den Abbau verzweigtkettiger Aminosäuren beeinträchtigen, und ist daher für Studien zur metabolischen Anpassung und zur mitochondrialen Physiologie relevant. In der Krebsbiologie und Immunmetabolik wurde der HMGCL‑abhängige Ketonkörperstoffwechsel als möglicher Beitrag zur Nährstoffnutzung und zu Signalzuständen unter Hypoxie oder Nährstoffmangel untersucht.
HMGCL Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HMGCL-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HMGCL abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HMGCL-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HMGCL-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.