HLA-DMβ CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406436

Übersicht

HLA-DMB kodiert die Beta-Kette von HLA-DM, einem nicht-klassischen MHC‑Klasse‑II‑Molekül, das die Beladung von HLA‑DR, ‑DP und ‑DQ mit Peptiden katalysiert, indem es die Freisetzung von CLIP fördert und hochaffine Peptid–MHC‑II‑Komplexe in späten endosomalen Kompartimenten stabilisiert. Dieser Editierschritt ist zentral für die Antigenverarbeitung und ‑präsentation und prägt die Priming‑Phase von CD4+‑T‑Zellen, die thymische Selektion sowie die periphere Immuntoleranz. Eine veränderte HLA‑DM‑Funktion kann das Immunopeptidom verschieben und inflammatorische Signalprogramme beeinflussen, die mit Autoimmunität und Immunfehlregulation verknüpft sind. Daher wird HLA‑DMB häufig im Kontext von HLA‑Klasse‑II‑Expressionsnetzwerken, interferonresponsiver Antigenpräsentation und krankheitsassoziierten HLA‑Haplotypen untersucht.

Das HLA-DMβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HLA-DMB-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HLA-DMB-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HLA-DMB nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HLA-DMβ-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HLA-DMB-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HLA-DMβ-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HLA-DMB-Exone abzielen, die für die HLA-DMβ-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HLA-DMB-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HLA-DMβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HLA-DMβ CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HLA-DMB-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HLA-DMβ HDR-Plasmid (h) und HLA-DMβ HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HLA-DMB-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HLA-DMB-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.