HLA-A Lentiviral Activation Particles (h): sc-400294-LAC

HLA-A kodiert eine klassische schwere Kette des MHC-Klasse-I-Komplexes, die sich mit β2‑Mikroglobulin paart, um intrazellulär erzeugte Peptide CD8+-T‑Zellen zu präsentieren und so die antigenspezifische Immunüberwachung zu prägen. Über Antigenprozessierungs- und Präsentationswege – einschließlich der proteasomalen Peptidgenerierung, des TAP-abhängigen Transports und der Peptidbeladung im endoplasmatischen Retikulum – trägt HLA-A dazu bei, die Zusammensetzung des Immunopeptidoms an der Zelloberfläche zu bestimmen. Variation in HLA-A beeinflusst Alloerkennung und Immunogenität und wird umfassend in Kontexten wie Infektionen, tumoralem Immunevasion und Autoimmunanfälligkeit untersucht. Als zentraler Determinant der Immunerkennung werden HLA-A-Expressionsniveaus und allelspezifische Peptidbindung häufig in Modellen der Immunologie, Onkologie und transplantationsbezogenen Forschung analysiert.

HLA-A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente HLA-A-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

HLA-A Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der HLA-A-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen HLA-A-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen HLA-A-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.