Plasmide CRISPR d'Activation (h) HIVEP3: sc-410084-ACT

HIVEP3 (humain) code un grand facteur de transcription à doigts de zinc, également appelé Schnurri-3, qui se lie à des éléments d’ADN de type κB et module des programmes transcriptionnels dépendants des stimuli. Il a été associé à la régulation de l’expression de gènes liés à NF-κB et, plus largement, au contrôle des sorties de signalisation immunitaire et inflammatoire, en intégrant des signaux issus de voies médiées par des récepteurs afin de façonner les réponses transcriptionnelles en aval. L’activité de HIVEP3 influence la différenciation cellulaire et l’homéostasie via un contrôle transcriptionnel spécifique au contexte, avec une pertinence rapportée pour la dérégulation immunitaire et des signatures d’expression complexes associées à des maladies. Ces caractéristiques font de HIVEP3 un nœud utile pour étudier les réseaux transcriptionnels qui couplent la signalisation à la régulation génique.

HIVEP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HIVEP3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HIVEP3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HIVEP3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HIVEP3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HIVEP3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HIVEP3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HIVEP3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HIVEP3 dans les cellules tumorales présentant une expression de HIVEP3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.