Histone Deacetylase 9 (HDAC9) CRISPR Activation Plasmid (m): sc-429766-ACT

Hdac9 kodiert die Histon-Deacetylase 9 (HDAC9), eine HDAC der Klasse IIa, die als epigenetischer Regulator Signale mit dem Chromatinzustand und Transkriptionsprogrammen verknüpft. HDAC9 pendelt zwischen Zytoplasma und Zellkern und wirkt häufig in Korepressorkomplexen, um die Histonacetylierung und Genexpression zu modulieren; dadurch beeinflusst es u. a. Prozesse wie Zelldifferenzierung, Stoffwechsel, inflammatorische Signalwege und Stressantworten. In Mausmodellen wird eine veränderte Hdac9-Aktivität häufig im Zusammenhang mit der Funktion von Immunzellen, dem Umbau von Herz- und Skelettmuskulatur sowie neuronaler Plastizität untersucht, wobei eine HDAC9-abhängige transkriptionelle Umprogrammierung den Phänotyp beeinflussen kann. Fehlregulierte HDAC9-assoziierte Signalwege sind für mechanistische Forschung zu kardiometabolischen Merkmalen, Fibrose und Neuroinflammation relevant, ohne dass daraus therapeutische Aussagen abgeleitet werden.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen Hdac9-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Histone Deacetylase 9 (HDAC9) Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (m) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des Hdac9-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der Hdac9-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Histone Deacetylase 9 (HDAC9)-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native Hdac9-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Histone Deacetylase 9 (HDAC9)-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Histone Deacetylase 9 (HDAC9)-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem Hdac9-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.