Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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HIC-1 Double Nickase Plasmid (h): sc-402118-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HIC-1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HIC-1 Double-Nickase-Plasmid (h) und HIC-1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HIC1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HIC-1: sc-271499
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HIC-1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-402118-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIC-1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402118-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes HIC1 („hypermethylated in cancer 1“) kodiert HIC-1, einen transkriptionellen Repressor mit BTB/POZ- und C2H2-Zinkfinger-Domänen, der Genexpressionsprogramme begrenzt, die mit Proliferation, DNA-Schadensantworten und zellulärer Differenzierung verknüpft sind. HIC-1 ist an chromatinbasierter Repression beteiligt, indem es Korepressoren rekrutiert, und steht damit in Verbindung zu p53-assoziierter Stresssignalgebung sowie zur epigenetischen Kontrolle der Transkription. Ein Verlust der HIC1-Aktivität ist häufig mit einer Hypermethylierung des Promotors und veränderten Transkriptionsnetzwerken assoziiert, die onkogene Phänotypen begünstigen. Als regulatorischer Knotenpunkt wird HIC-1 aufgrund seines Einflusses auf Zellzyklus-Checkpoints, auf apoptosisbezogene Transkriptionsziele und auf die kontextabhängige Kontrolle entwicklungsrelevanter Genexpression untersucht.
HIC-1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HIC1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HIC1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HIC1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HIC1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.