Plasmide CRISPR/Cas9 KO HES3 (h): sc-406281

Présentation

HES3 (hairy and enhancer of split 3) est un répresseur transcriptionnel de type hélice-boucle-hélice basique (bHLH) qui agit en aval de la signalisation Notch pour moduler des programmes d’expression génique contrôlant les décisions de destinée cellulaire. Il contribue au maintien d’états indifférenciés et à la régulation de l’engagement de lignée en s’opposant aux facteurs de transcription proneuronaux et associés à la différenciation, tout en intégrant des signaux issus des voies du développement. Dans les cellules humaines, une activité altérée de la famille HES a été associée à une différenciation dérégulée, à une prolifération aberrante et à des phénotypes de type « cellule souche » dans des contextes pertinents pour la maladie, faisant de HES3 un nœud utile pour étudier le contrôle transcriptionnel des programmes de développement. Ses rôles dans les réseaux géniques liés au neurodéveloppement et aux progéniteurs soutiennent l’étude du couplage signalisation–transcription et de la régulation épigénétique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HES3 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène HES3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du HES3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert HES3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HES3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en HES3 pour l'étude de la signalisation de HES3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de HES3 essentiels à la fonction de HES3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de HES3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HES3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HES3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus HES3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HES3 plasmide HDR (h) et le HES3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie HES3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles HES3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.