Hepsin Double Nickase Plasmid (h): sc-405081-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Hepsin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Hepsin Double-Nickase-Plasmid (h) und Hepsin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HPN abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Hepsin: sc-517056
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Hepsin Double Nickase Plasmid (h) | sc-405081-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Hepsin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405081-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HPN kodiert Hepsin, eine Typ‑II-transmembrane Serinprotease, die an der Zelloberfläche angereichert ist und dort an perizellulärer Proteolyse, dem Umbau der extrazellulären Matrix sowie der Regulation von Zell‑Zell- und Zell‑Matrix-Interaktionen beteiligt ist. Durch die Prozessierung extrazellulärer Substrate kann Hepsin proteaseaktivierte Signalwege und die Verfügbarkeit von Wachstumsfaktoren beeinflussen und ist damit mit Signalwegen verknüpft, die epitheliale Differenzierung, Gewebearchitektur und invasives Verhalten prägen. Eine dysregulierte HPN-Expression und veränderte Hepsin-Aktivität wurden in mehreren epithelialen Malignomen beschrieben, was HPN zu einem nützlichen molekularen Ansatzpunkt für die Untersuchung tumorassoziierter Proteasenetzwerke und des Crosstalks mit dem Mikromilieu macht. In der biomedizinischen Forschung wird HPN häufig im Hinblick auf seine Rollen in membranverankerten Proteasekaskaden, Zellmigration und Proteostase an der Plasmamembran untersucht.
Hepsin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HPN-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HPN abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HPN-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HPN-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.