Plásmido CRISPR de Activación (h) HEATR6: sc-412958-ACT

HEATR6 codifica una proteína que contiene repeticiones HEAT y se predice que funciona como andamio para complejos macromoleculares de proteínas, apoyando la organización espacial de factores de señalización y regulación en el citoplasma y el núcleo. Las proteínas enriquecidas en repeticiones HEAT suelen participar en el transporte nucleocitoplásmico, el ensamblaje de ribonucleoproteínas y la modulación de programas transcripcionales al coordinar interacciones multiproteicas. Aunque HEATR6 sigue estando caracterizada de manera incompleta, su arquitectura de dominios sugiere posibles funciones en la proteostasis y la regulación del estado celular, procesos que a menudo se ven alterados en contextos proliferativos y de respuesta al estrés. La desregulación de redes asociadas a andamiaje y transporte es relevante para estudios sobre estabilidad genómica, metabolismo del ARN y cambios en el control transcripcional asociados a enfermedades.

HEATR6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de HEATR6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

HEATR6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus HEATR6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional HEATR6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de HEATR6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo HEATR6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de HEATR6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía HEATR6 en células tumorales con expresión de HEATR6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.