Plásmido CRISPR de Activación (h) hDcp1a: sc-402543-ACT

DCP1A codifica hDcp1a, un componente central de los cuerpos de procesamiento citoplasmáticos (P-bodies), que sirven de andamiaje para el descapado del mRNA y su degradación 5′→3′. hDcp1a coopera con la enzima de descapado DCP2 y con activadores del descapado para coordinar el recambio de mRNA, la represión translacional y el control de calidad del ARN, conectando las respuestas al estrés con cambios dinámicos en la expresión génica. Mediante la regulación de la estabilidad de los transcritos, DCP1A influye en vías como la degradación de mRNA mediada por codones de terminación prematuros (nonsense-mediated mRNA decay), el silenciamiento mediado por microARN y el crosstalk entre gránulos de estrés y P-bodies. La degradación desregulada de mRNA y la biología de los P-bodies se han asociado con alteraciones de la proteostasis y con programas de señalización aberrantes observados en contextos de investigación sobre cáncer y enfermedades neurodegenerativas.

Dcp1a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de DCP1A sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Dcp1a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus DCP1A en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional DCP1A, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Dcp1a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo DCP1A y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Dcp1a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Dcp1a en células tumorales con expresión de DCP1A silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.