HCR Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-407960

Panoramica

CCHCR1 codifica la proteina umana a bastoncino α-elicoidale a coiled-coil (HCR), una proteina citoplasmatica e perinucleare coinvolta nella regolazione della differenziazione dei cheratinociti, dell’omeostasi della barriera epidermica e dell’organizzazione del citoscheletro. HCR è stata collegata a processi che influenzano il traffico vescicolare e la proliferazione cellulare, in linea con il suo arricchimento nei processi biologici della cute e del follicolo pilifero. La variabilità genetica e l’alterata espressione di CCHCR1 sono associate alla suscettibilità alla psoriasi e a fenotipi infiammatori cutanei correlati, a sostegno della sua rilevanza in vie che connettono le risposte allo stress epiteliale e la segnalazione immunitaria. Di conseguenza, CCHCR1 è spesso studiato in modelli di biologia dei cheratinociti, di crosstalk della segnalazione infiammatoria e di genetica delle malattie cutanee.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HCR (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene CCHCR1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del CCHCR1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto CCHCR1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HCR.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di CCHCR1 per lo studio della segnalazione di HCR, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni CCHCR1 critici per la funzione di HCR
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di CCHCR1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal HCR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HCR CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus CCHCR1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal HCR Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HCR (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia CCHCR1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio CCHCR1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.