H2-Q1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420774

Übersicht

H2-Q1 kodiert bei der Maus ein nichtklassisches MHC‑Klasse‑I‑Molekül (Klasse Ib), das zur Antigenpräsentation und zu immunregulatorischen Signalprozessen an der Zelloberfläche beiträgt. Im Vergleich zu den klassischen H‑2‑Molekülen ist H2‑Q1 häufig mit spezialisiertem Peptid‑Binding und der Erkennung durch bestimmte Subpopulationen von T‑Zellen sowie durch NK‑Zellrezeptoren verknüpft, was die Immunüberwachung und die periphere Toleranz beeinflusst. Seine Expression und Funktion greifen in Signalwege ein, die die Lymphozytenaktivierung, zytokingetriebene Entzündungen und die immunvermittelte Gewebehomöostase steuern. Eine fehlregulierte, Klasse‑I‑abhängige Erkennung wird häufig in Zusammenhängen wie Autoimmunität, Infektionen und Tumorimmunologie untersucht, wodurch H2‑Q1 ein nützlicher Genort ist, um Mechanismen der Immunflucht und der Immunpathologie zu analysieren.

Das H2-Q1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des H2-Q1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des H2-Q1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von H2-Q1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die H2-Q1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von H2-Q1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der H2-Q1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf H2-Q1-Exone abzielen, die für die H2-Q1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere H2-Q1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom H2-Q1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom H2-Q1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des H2-Q1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das H2-Q1 HDR-Plasmid (m) und H2-Q1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von H2-Q1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten H2-Q1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.