GULP CRISPR Activation Plasmid (h): sc-406041-ACT

Humanes **GULP1** kodiert **GULP**, ein Adapterprotein, das die phosphatidylserinabhängige Erkennung apoptotischer Zellen während der Efferocytose mit der intrazellulären Aufnahmemaschinerie verknüpft. Über Interaktionen mit Rezeptoren wie **LRP1/MEGF10** und nachgeschaltete Umbauschritte des Zytoskeletts koordiniert GULP Signalwege, die die Bildung des phagozytischen Cups, den Vesikeltransport und die Beseitigung zellulärer Trümmer steuern. Diese Prozesse tragen zur Gewebehomöostase und zur Auflösung von Entzündungen bei; eine veränderte Regulation der Clearance apoptotischer Zellen wurde in experimentellen Systemen mit chronischen Entzündungszuständen und neurodegenerativen Phänotypen in Verbindung gebracht. Entsprechend wird **GULP1** häufig in Zusammenhängen untersucht, die Immunzellfunktionen, die Biologie der Mikroglia und rezeptorvermittelte Endozytose betreffen.

GULP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GULP1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

GULP Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GULP1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GULP1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen GULP-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GULP1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von GULP-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des GULP-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GULP1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.