Plásmido CRISPR de Activación (h) G_{α 15}: sc-403266-ACT

GNA15 codifica la subunidad alfa Gα15 de las proteínas G heterotriméricas, un miembro de la familia Gq que acopla diversos receptores acoplados a proteína G (GPCR) con la activación de la fosfolipasa C-β. Este eje de señalización impulsa la producción de inositol trifosfato y diacilglicerol, la movilización de calcio y programas transcripcionales dependientes de la proteína quinasa C que determinan la activación de células inmunitarias y hematopoyéticas. Gα15 está enriquecida en linajes leucocitarios y puede ampliar la especificidad de acoplamiento de receptores, influyendo en la quimiotaxis, la liberación de citocinas y la expresión génica sensible al estrés. La desregulación de la señalización GPCR–Gα15 se ha implicado en una señalización inflamatoria aberrante y en una actividad alterada de los factores de crecimiento y de la vía MAPK en contextos celulares relevantes para la enfermedad.

Gα 15 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GNA15 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Gα 15 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GNA15 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GNA15, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Gα 15. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GNA15 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Gα 15 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Gα 15 en células tumorales con expresión de GNA15 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.