Gα 12 Double Nickase Plasmid (h): sc-401264-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Gα 12 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Gα 12 Double-Nickase-Plasmid (h) und Gα 12 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GNA12 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Gα 12: sc-515445
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Gα 12 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401264-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Gα 12 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401264-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNA12 kodiert die menschliche heterotrimere G‑Protein‑α‑Untereinheit Gα12, einen zentralen Signalüberträger, der Signale zahlreicher GPCRs an nachgeschaltete Effektoren weiterleitet, welche die Zytoskelettdynamik und transkriptionelle Programme regulieren. Aktiviertes Gα12 rekrutiert häufig RhoGEFs, um die RhoA‑Signalgebung zu stimulieren, was das Aktin‑Remodeling, Zellform, Adhäsion und Motilität beeinflusst und mit MAPK‑ sowie anderen Stressantwort‑Signalwegen verknüpft ist. Über diese Netzwerke trägt GNA12 zu Prozessen wie epithelial‑mesenchymaler Transition, Migration und Proliferationskontrolle in unterschiedlichen Zellkontexten bei. Veränderte Gα12‑Signalgebung wird mit dysreguliertem Wachstum und invasiven Phänotypen in der Krebsbiologie sowie mit weiter gefassten Störungen GPCR‑abhängiger Signalwege in Forschungsmodellen mit Relevanz für kardiovaskuläre und entzündliche Fragestellungen in Verbindung gebracht.
Gα 12 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GNA12-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GNA12 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GNA12-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GNA12-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.