Plásmido CRISPR de Activación (h) GSTP1: sc-402084-ACT

GSTP1 codifica la glutatión S-transferasa pi 1, una enzima de desintoxicación de fase II que cataliza la conjugación de glutatión a compuestos electrofílicos, incluidos metabolitos reactivos y productos de la peroxidación lipídica. Mediante la regulación del equilibrio redox celular y del metabolismo de xenobióticos, GSTP1 influye en las respuestas al estrés oxidativo, la señalización de la apoptosis y la modulación de la vía MAPK/JNK. La expresión alterada de GSTP1 se estudia con frecuencia en el contexto de la adaptación al estrés químico y el metabolismo de fármacos, y la regulación epigenética de GSTP1 se ha asociado con la biología tumoral en múltiples tipos de tejidos. Como gen de desintoxicación vinculado a biomarcadores, GSTP1 se investiga habitualmente en modelos de carcinogénesis, inflamación y exposición ambiental.

GSTP1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GSTP1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GSTP1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GSTP1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GSTP1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GSTP1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GSTP1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GSTP1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GSTP1 en células tumorales con expresión de GSTP1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.