Grx1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-418056-ACT

ヒトのGLRXは、グルタレドキシン-1（Grx1）をコードしている。Grx1は細胞質に局在するチオール‐ジスルフィド酸化還元酵素で、脱グルタチオン化（deglutathionylation）を触媒し、細胞内のレドックス恒常性の維持に寄与する。タンパク質のS-グルタチオン化を制御することで、Grx1は、グルタチオン代謝、抗酸化防御、ならびにアポトーシスや炎症のレドックス感受性制御に関連するシグナル伝達およびストレス応答経路に影響を及ぼす。Grx1の活性はミトコンドリア機能、プロテオスタシス、活性酸素種（ROS）および活性窒素種（RNS）への応答にも影響し、より広範な酸化ストレス応答プログラムと統合されている。GLRX/Grx1機能の破綻は、炎症性・代謝性ストレス表現型や酸化傷害に対する細胞レジリエンスの変化など、複数の疾患関連状況で観察されるレドックス不均衡と関連づけられている。

Grx1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GLRXの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Grx1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GLRX 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGLRX転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Grx1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGLRX遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGrx1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGLRX発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGrx1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。