granzyme K CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407038

Übersicht

GZMK kodiert Granzyme K, eine trypsinähnliche Serinprotease, die in den Granula zytotoxischer Lymphozyten gespeichert und an immunologischen Synapsen freigesetzt wird, um Zielzellantworten und inflammatorische Signalwege zu modulieren. Die Aktivität von Granzyme K ist mit zytotoxischen Effektorprogrammen, der proteolytischen Umgestaltung intrazellulärer Substrate sowie mit Crosstalk zu apoptotischen und Stressantwort-Signalwegen verknüpft, die Gewebeschädigung und Immunregulation beeinflussen. In der menschlichen Immunität ist die GZMK-Expression charakteristisch für aktivierte CD8+-T-Zellen und bestimmte NK-Zell-Subsets und wird häufig als Marker für Immunaktivierung und zytotoxische Differenzierung verwendet. Eine fehlregulierte GZMK-Expression wurde mit inflammatorischen Mikroumgebungen und immunvermittelter Pathologie in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in Kontexten wie Infektionen, Autoimmunität und Tumorimmunologie unterstützt.

Das granzyme K CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GZMK-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GZMK-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GZMK nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die granzyme K-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GZMK-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der granzyme K-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GZMK-Exone abzielen, die für die granzyme K-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GZMK-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom granzyme K CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom granzyme K CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GZMK-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das granzyme K HDR-Plasmid (h) und granzyme K HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GZMK-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GZMK-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.