granzyme K Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407038

Descripción general

GZMK codifica la granzima K, una proteasa de serina tipo tripsina almacenada en los gránulos de los linfocitos citotóxicos y liberada en las sinapsis inmunológicas para modular las respuestas de las células diana y la señalización inflamatoria. La actividad de la granzima K se asocia con programas efectores citotóxicos, el remodelado proteolítico de sustratos intracelulares y la comunicación cruzada con vías apoptóticas y de respuesta al estrés que influyen en el daño tisular y la regulación inmunitaria. En la inmunidad humana, la expresión de GZMK es característica de células T CD8+ activadas y de subpoblaciones de células NK, y se utiliza con frecuencia como marcador de activación inmunitaria y diferenciación citotóxica. La desregulación de la expresión de GZMK se ha vinculado a microambientes inflamatorios y a patología mediada por el sistema inmune, lo que respalda su estudio en contextos de infección, autoinmunidad e inmunología tumoral.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO granzyme K (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GZMK en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GZMK junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GZMK tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína granzyme K.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GZMK para la investigación de la señalización de granzyme K, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GZMK críticos para la función de granzyme K
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GZMK para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido granzyme K CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido granzyme K CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GZMK. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR granzyme K (h) y el plásmido HDR granzyme K (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GZMK para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GZMK definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.