Plasmide CRISPR d'Activation (h) granulysin: sc-403208-ACT

Le gène humain **GNLY** code la granulysine, une protéine effectrice cytolytique et pro-inflammatoire stockée dans les granules cytotoxiques des cellules NK et des lymphocytes T CD8+ activés. Lors de la formation de la synapse immunologique, la granulysine est libérée afin de favoriser l’activité antimicrobienne et de contribuer à la destruction des cellules cibles en coordination avec la perforine et les granzymes, modulant ainsi les réponses immunitaires innées et adaptatives. L’expression de **GNLY** est associée aux programmes d’activation lymphocytaire et aux états de différenciation cytotoxique, et sa dérégulation est étudiée dans des contextes de dysfonction immunitaire, d’infections chroniques, de surveillance immunitaire antitumorale et de mécanismes de maladies inflammatoires. En tant qu’indicateur de la biologie des lymphocytes cytotoxiques, **GNLY** est fréquemment utilisé comme marqueur et médiateur fonctionnel en immunologie et dans la recherche sur les interactions hôte–pathogène.

granulysin Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GNLY sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

granulysin Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GNLY dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GNLY, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de granulysin. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GNLY natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de granulysin au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie granulysin dans les cellules tumorales présentant une expression de GNLY silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.