Plásmido CRISPR de Activación (h) GPRC5D: sc-403114-ACT

GPRC5D (receptor acoplado a proteína G, clase C, grupo 5, miembro D) codifica una proteína de membrana tipo GPCR huérfana, enriquecida en contextos epiteliales y vinculada a señales asociadas a la diferenciación. Como miembro de una familia sensible al ácido retinoico, GPRC5D se estudia por sus conexiones con programas transcripcionales que influyen en el estado celular, la señalización de receptores de membrana y las interacciones con el microambiente. Se ha informado de una expresión alterada de GPRC5D en investigaciones sobre neoplasias hematológicas, en particular en la biología de las células plasmáticas, y también se examina en conjuntos de datos de tumores sólidos e inmuno-oncología. Estas características hacen de GPRC5D una diana útil para investigar redes reguladoras ligadas a receptores y fenotipos asociados al linaje en células humanas.

GPRC5D El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPRC5D sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPRC5D El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPRC5D en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPRC5D, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPRC5D. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPRC5D y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPRC5D en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPRC5D en células tumorales con expresión de GPRC5D silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.