GPR92 Double Nickase Plasmid (m): sc-436329-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR92 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR92 Double-Nickase-Plasmid (m) und GPR92 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Lpar5 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR92 Double Nickase Plasmid (m) | sc-436329-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR92 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-436329-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Lpar5 codiert den murinen Lysophosphatidsäure-Rezeptor GPR92, einen Klasse‑A‑GPCR, der extrazelluläre Lipidsignale in intrazelluläre Second‑Messenger‑Antworten überführt. Nach Aktivierung kann GPR92 heterotrimere G‑Proteine rekrutieren, um die cAMP-Produktion zu regulieren, die Phospholipase‑C‑Signalgebung mit Ca²⁺‑Mobilisierung sowie die nachgeschaltete Aktivität des MAPK/ERK‑Signalwegs zu steuern, wodurch Zellmigration, Überleben und inflammatorische Genexpressionsprogramme geprägt werden. Die LPA–GPR92‑Signalgebung wurde mit neuroimmuner Kommunikation und peripheren Entzündungsreaktionen in Verbindung gebracht, und eine Fehlregulation GPCR‑vermittelter Lipidsignalgebung ist in Modellen für Schmerz, Immunaktivierung und Gewebeumbau relevant. Diese Eigenschaften machen Lpar5 zu einem nützlichen Ziel für die Untersuchung der Biologie von Lipidmediatoren und GPCR‑abhängigen Signalnetzwerken in murinen Systemen.
GPR92 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Lpar5-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Lpar5 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Lpar5-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Lpar5-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.