GPR91 Double Nickase Plasmid (m): sc-429973-NIC
- Zielspezies: mouse
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR91 Double Nickase Plasmid (m) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR91 Double-Nickase-Plasmid (m) und GPR91 Double-Nickase-Plasmid (m2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf Sucnr1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR91 Double Nickase Plasmid (m) | sc-429973-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR91 Double Nickase Plasmid (m2) | sc-429973-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Mouse Sucnr1 kodiert GPR91, einen succinat-sensierenden G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der metabolischen Stress mit inflammatorischer und vaskulärer Signalgebung verknüpft. Extrazelluläres Succinat, das während Hypoxie, Ischämie oder mitochondrialer Dysfunktion entsteht, kann GPR91 aktivieren und nachgeschaltete Signalwege anstoßen, darunter Gαi-/Gαq‑vermittelte Signalübertragung, MAPK/ERK‑Aktivierung, intrazelluläre Ca²⁺‑Flüsse sowie die Modulation von cAMP; dadurch werden Zytokinproduktion und parakrine Kommunikation beeinflusst. Die Aktivität von GPR91 wurde u. a. im Kontext der Nierenphysiologie und von Verletzungsreaktionen, der retinalen angiogenen Signalgebung, der Entzündung im Fettgewebe und der Aktivierung von Immunzellen untersucht, was Sucnr1 zu einem hilfreichen Knotenpunkt macht, um immunmetabolische Regulation zu analysieren. Diese Prozesse sind relevant für experimentelle Modelle des metabolischen Syndroms, der Fibrose und des entzündlichen Gewebeumbaus, in denen eine Succinatakkumulation als Signalcue dient.
GPR91 Das Double-Nickase-Plasmid (m) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des Sucnr1-Lokus in mouse-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von Sucnr1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die Sucnr1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit Sucnr1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.