Particules Lentivirales d'Activation (h) GPR56: sc-406370-LAC

ADGRG1 (GPR56) code un récepteur couplé aux protéines G de type adhésion, qui relie les interactions avec la matrice extracellulaire à des programmes de signalisation intracellulaire régulant l’adhérence cellulaire, la migration et la dynamique du cytosquelette. GPR56 mobilise des voies dépendantes des protéines G et de la famille Rho pour influencer le remodelage de l’actine, l’organisation des adhésions focales et la polarité cellulaire, et il est impliqué dans des processus neurodéveloppementaux, notamment le positionnement des neurones et l’organisation corticale. Dans le système immunitaire et le microenvironnement tumoral, l’expression d’ADGRG1 a été associée à la modulation du comportement des leucocytes et de phénotypes invasifs via une signalisation dépendante de l’adhésion. Une activité ou une expression dérégulée de GPR56 est donc pertinente pour les études du développement cérébral, de la communication cellule–matrice et des modifications de la motilité cellulaire associées aux maladies.

Les particules d'activation lentivirales GPR56 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de ADGRG1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPR56 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription ADGRG1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPR56. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif ADGRG1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.