Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
Nicht CRISPR-Daten: Das Bild veranschaulicht die Qualität von Antikörpern zur Visualisierung von CRISPR-Experimentergebnissen.
GPR56 Lentiviral Activation Particles (h): sc-406370-LAC
- Zielspezies: human
- 200 µl transduktionsfertige, hoch-titer CRISPR/dCas9 Lentivirale Aktivierungs-Partikel
- GPR56 Lentiviral Activation Particles (h) sind ein SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) gesteuertes System zur Transkriptionsaktivierung eines gewünschten Zielgens, um wirkungsvoll die spezifische Genexpression mittels lentiviraler Transduktion der Zellen zu erhöhen
- GPR56 Lentiviral Activation Particles (h) enthalten die folgenden SAM Aktivierungselemente: deaktivierte Cas9 (dCas9) Nuklease (D10A und N863A) fusioniert an die Transaktivierungs-Domäne VP64, ein MS2-p65-HSF1 Fusionsprotein und eine zielspezifische 20nt gRNA. Des Weiteren enthalten sind die Resistenzgene für blasticidin, hygromycin und puromycin
- Der entstehende SAM-Komplex (Mediator-Komplex zur synergistischen Gen-Aktivierung) bindet eine sequenzspezifische Region 200-250 nt upstream (in 5'-Richtung) des Transkriptionsstartsignals und rekrutiert dort ständig Transkriptionsfaktoren für eine verstärkte Gen-Aktivierung und Gen-Expression.
- Die von GPR56 Lentiviral Activation Plasmid (h) und GPR56 Lentiviral Activation Plasmid (h2) kodierten gRNAs zielen auf unterschiedliche regulatorische Regionen des ADGRG1-Promotors ab. Eines oder beide Designs sind möglicherweise verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz der Genaktivierung per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GPR56 Antibody (G-6): sc-390192
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR56 Lentiviral Activation Particles (h) | sc-406370-LAC | 200 µl | $455.00 | |||
GPR56 Lentiviral Activation Particles (h2) | sc-406370-LAC-2 | 200 µl | $455.00 |
ADGRG1 (GPR56) kodiert einen Adhäsions‑G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor, der Interaktionen mit der extrazellulären Matrix an intrazelluläre Signalprogramme koppelt, welche Zelladhäsion, Migration und die Dynamik des Zytoskeletts regulieren. GPR56 aktiviert G‑Protein‑Signalwege und Rho‑Familien‑Signalgebung und beeinflusst dadurch die Aktin‑Remodellierung, die Organisation fokaler Adhäsionen und die Zellpolarität; außerdem ist es an neuroentwicklungsbezogenen Prozessen beteiligt, einschließlich der neuronalen Positionierung und der Organisation der Großhirnrinde. Im Immunsystem und in der Tumormikroumgebung wurde die Expression von ADGRG1 mit der Modulation des Verhaltens von Leukozyten sowie mit invasiven Phänotypen über adhäsionsabhängige Signalgebung in Verbindung gebracht. Eine Fehlregulation der GPR56‑Aktivität oder ‑Expression ist daher relevant für Studien zur Gehirnentwicklung, zur Zell‑Matrix‑Kommunikation und zu krankheitsassoziierten Veränderungen der Zellmotilität.
GPR56 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente ADGRG1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.
GPR56 Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der ADGRG1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen GPR56-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen ADGRG1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.
Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.