GPR50 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402934-ACT

GPR50 codifica um receptor órfão acoplado à proteína G (GPCR) mais intimamente relacionado aos receptores de melatonina e é enriquecido em tecidos neuroendócrinos, onde está implicado na regulação da fisiologia circadiana e metabólica. Embora não se ligue à melatonina com alta afinidade, o GPR50 pode modular a sinalização de GPCR por meio de interações entre receptores e do tráfego receptor, influenciando vias de segundos mensageiros que moldam a excitabilidade neuronal e as respostas hormonais. Associações relatadas relacionam variações no GPR50 ou expressão alterada a transtornos do humor, fenótipos de sono e sazonais e características metabólicas, sustentando sua relevância para pesquisas sobre o SNC e o balanço energético. Como uma proteína de membrana semelhante a receptor, o GPR50 também é usado para estudar a evolução de GPCRs, a dimerização de receptores e a sinalização dependente do contexto em modelos de células humanas.

GPR50 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GPR50 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR50 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GPR50 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GPR50, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR50. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GPR50 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR50 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR50 em células tumorais com expressão de GPR50 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.