GPR35 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-425672-ACT

O gene **Gpr35** de camundongo codifica o **GPR35**, um receptor acoplado à proteína G expresso em tipos celulares do sistema imune e associados ao trato gastrointestinal, onde modula respostas quimiotáticas, a sinalização de citocinas e programas relacionados à barreira epitelial. A atividade do GPR35 está ligada a vias de segundos mensageiros mediadas por GPCR, incluindo sinalização dependente de **Gαi/o**, recrutamento de **β-arrestina** e regulação a jusante de **MAPK/ERK** e de respostas transcricionais relacionadas. Em modelos experimentais, alterações na sinalização de GPR35 têm sido associadas a circuitos inflamatórios no intestino e à homeostase imune mais ampla, reforçando sua relevância para estudos de inflamação de mucosa e remodelamento tecidual mediado pelo sistema imune. Como o GPR35 responde a sinais metabólicos e inflamatórios, ele é frequentemente investigado em contextos que conectam metabólitos microbianos, detecção de nutrientes e função de leucócitos.

GPR35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Gpr35 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

GPR35 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Gpr35 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Gpr35, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de GPR35. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Gpr35 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de GPR35 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via GPR35 em células tumorais com expressão de Gpr35 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.