GPR3 Double Nickase Plasmid (h): sc-405441-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPR3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPR3 Double-Nickase-Plasmid (h) und GPR3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPR3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GPR3: sc-271875
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPR3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405441-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPR3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405441-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR3 kodiert einen verwaisten G‑Protein‑gekoppelten Rezeptor der Klasse A, der eine konstitutive Signalaktivität zeigt und dabei besonders ausgeprägt an Gs koppelt, um das intrazelluläre cAMP zu erhöhen. Über cAMP/PKA‑abhängige Signalwege kann GPR3 die neuronale Erregbarkeit, den Zellzyklus‑Fortschritt und Differenzierungsprogramme beeinflussen; außerdem wurde es mit der Regulation des meiotischen Arrests in Oozyten sowie mit Aspekten der metabolischen Homöostase in Verbindung gebracht. Im Nervensystem ist die GPR3‑Expression in mehreren Hirnregionen angereichert und wird mit der Modulation synaptischer Signalübertragung sowie neuroinflammatorischer Antworten verknüpft. Veränderte GPR3‑Aktivität oder ‑Expression wurde in Forschungszusammenhängen mit neurodegenerationsbezogenen Prozessen, Stimmungs‑ und Kognitionsphänotypen sowie metabolischen Merkmalen assoziiert, was seine Relevanz für die mechanistische Untersuchung von Signalwegen unterstreicht.
GPR3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPR3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPR3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPR3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPR3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.