Date published: 2026-7-15

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Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR18 (h): sc-407609

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Fiches techniques
  • Espèces cibles: human
  • 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
  • GPR18 Le plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) est un ensemble de plasmides, chacun codant pour la nucléase Cas9 et un ARN guide (gRNA) de 20 nt spécifique à la cible, conçu pour une efficacité de knockout maximale à l'aide de séquences issues de la bibliothèque GeCKO v2
  • Les séquences d'ARN guide (gRNA) dirigent Cas9 pour induire des cassures double brin (DSB) spécifiques au site dans le locus génomique GPR18, entraînant un knock-out génique par jonction non homologue (NHEJ)
  • Le plasmide HDR GPR18 (h) (sc-407609-HDR) est recommandé pour une co-transfection avec le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR18 (h) afin de permettre la sélection des cellules éditées avec succès grâce à l'intégration, médiée par HDR, d'un cassette de résistance à la puromycine et d'un gène rapporteur RFP
  • Le plasmide HDR GPR18 (h) est un ensemble de plasmides, chacun contenant un matrice de réparation dirigée par homologie (HDR) correspondant aux sites cibles de l'ARN guide (gRNA) dans le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR18 (h)
  • Chaque plasmide HDR contient deux bras d'homologie d'environ 800 pb flanquant les cassettes de résistance à la puromycine et RFP, conçus pour se lier aux séquences d'ADN génomique entourant le site de cassure double brin induit par Cas9 et faciliter une intégration précise médiée par HDR
  • Les gènes de résistance à la puromycine et RFP sont flanqués de sites LoxP, permettant la suppression des marqueurs de sélection via la recombinase Cre (Cre Vector : sc-418923) après l'établissement de lignées cellulaires knock-out stables
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    Informations pour la commande

    Nom du produitRef. CatalogueCOND.Prix HTQTÉFavoris

    Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR18 (h)

    sc-407609
    20 µg
    $397.00

    Plasmid HDR GPR18 (h)

    sc-407609-HDR
    20 µg
    $445.00

    Présentation

    GPR18 code un récepteur orphelin de classe A couplé aux protéines G, exprimé dans de nombreux tissus immunitaires et périphériques, où il régule la migration cellulaire, la chimiotaxie et la signalisation inflammatoire. Le couplage rapporté à des voies liées à Gi/o influence la dynamique des seconds messagers et les cascades de kinases en aval, intégrant des signaux qui façonnent le trafic leucocytaire et l’homéostasie tissulaire. L’activité de GPR18 a été étudiée dans le contexte d’une signalisation lipidique de type endocannabinoïde, avec des liens avec la modulation des réponses cytokiniques et des fonctions immunitaires associées aux barrières. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GPR18 ont été associées, dans des modèles expérimentaux, à une dérégulation immunitaire et à des phénotypes pertinents pour les maladies inflammatoires, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique en immunologie et en recherche neuro-immunitaire.

    Le GPR18 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR18 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide du pool co-exprime un sgRNA unique, ciblant un site distinct au sein du locus GPR18, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes, et code pour la GFP afin de permettre l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès. Cette stratégie multi-guide augmente la probabilité d'induire des décalages de cadre ou des délétions produisant un knock-out fonctionnel, offrant ainsi une alternative plus robuste aux approches à guide unique. Les cassures double brin (DSB) induites à plusieurs sites sont résolues par jonction non homologue (NHEJ) ou, lorsqu'elles sont utilisées avec le modèle donneur HDR inclus, par réparation dirigée par homologie (HDR) à un site cible défini au sein du locus.

    Lorsqu'il est utilisé en conjonction avec le donneur HDR exprimant la RFP, les fluorescences GFP et RFP peuvent être utilisées conjointement pour distinguer les populations de cellules transfectées de celles éditées, rationalisant ainsi les workflows de tri par cytométrie en flux et de sélection de clones.

    Donneur de réparation dirigée par homologie (HDR) — Cassette de puromycine avec rapporteur RFP

    Pour les applications nécessitant des clones knock-out confirmés et sélectionnables, le GPR18 plasmide HDR (h) comprend une construction donneuse HDR contenant une cassette de résistance à la puromycine (PuroR) et un rapporteur protéine fluorescente rouge (RFP), flanquée de bras d'homologie spécifiques à un site cible GPR18 défini.
    Lorsqu'il est co-transfecté avec le plasmide GPR18 CRISPR/Cas9 KO (h):

    • La cassette PuroR-RFP s'intègre au site de coupure de Cas9 via HDR, perturbant le cadre de lecture ouvert GPR18.
      La fluorescence RFP fournit un indicateur visuel immédiat de la réussite de l'intégration, permettant l'identification ou le tri par fluorescence des cellules éditées avant ou parallèlement à la sélection par la puromycine.
      Les cellules éditées avec succès sont confirmées par leur résistance à la puromycine, ce qui réduit considérablement la charge de criblage des clones.
      Cette stratégie de sélection est idéale pour générer des lignées cellulaires KO clonales stables destinées à des études fonctionnelles en aval, au criblage de médicaments ou au développement de modèles.

    Système de suppression de la cassette Cre-lox

    La construction donneuse HDR comporte des sites loxP flanquant la cassette de sélection PuroR-RFP afin de permettre une suppression propre du marqueur après confirmation du clone. L'expression transitoire de la recombinase Cre via le vecteur Cre inclus Cre Vector: sc-418923 excise la cassette, laissant un site loxP résiduel minimal au sein du locus GPR18 et éliminant les effets de confusion potentiels sur les tests en aval.
    Cette approche en deux étapes :

    • Minimise la perturbation de l'architecture locale de la chromatine et des éléments régulateurs voisins
      Restaure un contexte génomique quasi-naturel au niveau du locus édité
      Permet la réutilisation de la stratégie de sélection à la puromycine dans la même lignée cellulaire pour des modifications supplémentaires

    Caractéristiques principales

    • gRNA ciblant le ou les exons GPR18 essentiels à la fonction GPR18
      Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
      Donneur HDR avec résistance à la puromycine pour une sélection positive des clones
      Cassette PuroR flanquée de loxP avec vecteur de recombinase Cre pour une suppression transparente du marqueur
      Fourni prêt à l'emploi pour une administration par transfection

    Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.