Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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GPI Double Nickase Plasmid (h): sc-402796-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GPI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GPI Double-Nickase-Plasmid (h) und GPI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPI abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: GPI: sc-365066
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GPI Double Nickase Plasmid (h) | sc-402796-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GPI Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402796-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Glucose-6-phosphat-Isomerase (GPI) ist ein zytosolisches Enzym, das die reversible Umwandlung von Glucose-6-phosphat und Fructose-6-phosphat katalysiert, damit Glykolyse und Gluconeogenese miteinander verknüpft und die zelluläre Energiebilanz beeinflusst. Durch die Steuerung des Kohlenstoffflusses durch den zentralen Stoffwechsel kann GPI die Redox-Homöostase und die Verfügbarkeit biosynthetischer Vorstufen in proliferierenden sowie stressadaptierten Zellen beeinflussen. Über seine kanonische enzymatische Funktion hinaus wird GPI – je nach Kontext – auch mit extrazellulären Signalaktivitäten in Verbindung gebracht, die Zellmotilität und Interaktionen mit der Mikroumgebung modulieren können. Genetische oder funktionelle Störungen von GPI sind mit metabolischer Dysregulation assoziiert und wurden im Zusammenhang mit Anämie und neuroentwicklungsbezogenen Phänotypen sowie mit Stoffwechseleigenschaften untersucht, wie sie in Krebsmodellen beobachtet werden.
GPI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPI-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPI abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPI-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPI-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.