GPI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402796

Visão geral

A isomerase de glicose-6-fosfato (GPI) é uma enzima multifuncional que catalisa a interconversão reversível entre glicose-6-fosfato e frutose-6-fosfato, uma etapa central que liga a glicólise à gliconeogênese. Ao controlar o fluxo de carbono por essas vias, a GPI influencia a produção celular de ATP, a disponibilidade de precursores biossintéticos e o equilíbrio redox, moldando assim a adaptação metabólica sob estresse. Além de seu papel metabólico no citosol, foi relatado que a GPI participa de contextos de sinalização extracelular, conectando o metabolismo à motilidade celular e a interações com o microambiente. Alterações na atividade ou na expressão de GPI estão associadas à desregulação metabólica e têm sido estudadas em contextos como anemia decorrente de deficiência enzimática hereditária e remodelamento metabólico observado em modelos de doenças proliferativas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO GPI (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GPI em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GPI, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GPI na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína GPI.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GPI para a investigação da sinalização de GPI, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GPI críticos para a função GPI
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GPI para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo GPI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo GPI Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GPI. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo GPI Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR GPI (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GPI para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GPI definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.