Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPD1 (h): sc-403706

Présentation

Le gène humain **GPD1** code la glycér ol‑3‑phosphate déshydrogénase 1 cytosolique, une enzyme dépendante du NADH qui interconvertit le dihydroxyacétone phosphate et le glycérol‑3‑phosphate, reliant ainsi la glycolyse à la synthèse des glycérolipides et à l’équilibrage redox. Par son rôle dans la navette du phosphate de glycérol et dans la production de précurseurs des triglycérides et des phospholipides, **GPD1** influence l’homéostasie cytosolique NAD⁺/NADH, le métabolisme énergétique et les programmes de stockage lipidique. Une activité de **GPD1** altérée a été associée à un remodelage métabolique dans le foie et le tissu adipeux, et est étudiée dans le contexte de la dyslipidémie, des voies liées à la résistance à l’insuline et, plus largement, du couplage redox mitochondrie–cytosol. Ces fonctions font de **GPD1** un nœud pertinent pour étudier la répartition des flux de carbone entre la glycolyse et la biosynthèse lipidique en conditions de stress nutritif ou sous signalisation hormonale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPD1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPD1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPD1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPD1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPD1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPD1 pour l'étude de la signalisation de GPD1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPD1 essentiels à la fonction de GPD1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPD1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPD1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPD1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPD1 plasmide HDR (h) et le GPD1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPD1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPD1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.