GP-39 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402147

Übersicht

CHI3L1 kodiert GP-39 (YKL-40), ein sezerniertes Glykoprotein aus der Chitinase-ähnlichen Familie, das keine enzymatische Aktivität besitzt, jedoch die Organisation der extrazellulären Matrix, die Zelladhäsion und den Gewebeumbau moduliert. GP-39 wird von verschiedenen Zelltypen produziert, darunter Makrophagen, Neutrophile und fibroblastenähnliche Zellen, und steht in Verbindung mit inflammatorischer Signalübertragung sowie stromal–immunologischen Interaktionen. Es ist an der Regulation angiogener und fibrotischer Prozesse beteiligt und wird häufig in Kontexten untersucht, die chronische Entzündung und einen gestörten Matrixumsatz betreffen. Eine fehlregulierte CHI3L1-Expression wurde mit unterschiedlichen krankheitsrelevanten Phänotypen assoziiert, darunter tumorassoziiertes Stroma, Neuroinflammation sowie metabolische und entzündliche Zustände der Atemwege, was CHI3L1 zu einem nützlichen Knotenpunkt für Pathway- und Biomarker-Mechanismusforschung macht.

Das GP-39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CHI3L1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CHI3L1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CHI3L1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GP-39-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CHI3L1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GP-39-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CHI3L1-Exone abzielen, die für die GP-39-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CHI3L1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GP-39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GP-39 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CHI3L1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GP-39 HDR-Plasmid (h) und GP-39 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CHI3L1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CHI3L1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.