glypican-4 Double Nickase Plasmid (h): sc-405200-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das glypican-4 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- glypican-4 Double-Nickase-Plasmid (h) und glypican-4 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GPC4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: glypican-4: sc-517403
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
glypican-4 Double Nickase Plasmid (h) | sc-405200-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
glypican-4 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-405200-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Humanes GPC4 kodiert Glypican-4, ein glykosylphosphatidylinositol-(GPI)-verankertes Heparansulfat-Proteoglykan, das an der Zelloberfläche lokalisiert ist und die Präsentation extrazellulärer Liganden moduliert. Durch die Bindung von Wachstumsfaktoren, Morphogenen und Komponenten der extrazellulären Matrix kann Glypican-4 die Signalübertragung von Rezeptor-Tyrosinkinasen sowie Entwicklungswege wie Wnt/β‑Catenin und Hedgehog beeinflussen und so Zellproliferation, Differenzierung und Gewebemusterbildung mitprägen. Die Aktivität von GPC4 wurde in Kontexten wie der Neuroentwicklung, synapsenbezogenen Prozessen und der Stoffwechselregulation über Netzwerke des Fettgewebes und insulinresponsiver Signalwege untersucht. Eine veränderte Expression oder Regulation von GPC4 wurde in mehreren krankheitsrelevanten Forschungsbereichen beschrieben, was seinen Einsatz als Zielstruktur zur Untersuchung fehlregulierter Signalwege und der Zell‑Zell‑Kommunikation stützt.
glypican-4 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GPC4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GPC4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GPC4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GPC4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.