Plasmide Double Nickase (h) glypican-4: sc-405200-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) glypican-4 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide glypican-4 Double Nickase (h) et le plasmide glypican-4 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPC4. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: glypican-4 Antibody (AT51E3): sc-517403
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) glypican-4 | sc-405200-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) glypican-4 | sc-405200-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GPC4** code la glypican-4, un protéoglycane à héparane sulfate ancré au glycosylphosphatidylinositol (GPI), localisé à la surface cellulaire et modulant la présentation des ligands extracellulaires. En se liant à des facteurs de croissance, des morphogènes et des composants de la matrice extracellulaire, la glypican-4 peut influencer la signalisation des récepteurs à activité tyrosine kinase ainsi que des voies du développement telles que Wnt/β-caténine et Hedgehog, façonnant la prolifération cellulaire, la différenciation et l’organisation des tissus. L’activité de GPC4 a été étudiée dans des contextes incluant le neurodéveloppement, des processus liés aux synapses et la régulation métabolique via des réseaux de signalisation adipocytaires et sensibles à l’insuline. Des modifications d’expression ou de régulation de GPC4 ont été rapportées dans plusieurs domaines de recherche liés aux maladies, ce qui soutient son utilisation comme cible pour explorer la dérégulation des voies de signalisation et de la communication cellule–cellule.
glypican-4 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPC4 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPC4. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPC4. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPC4.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.