Plasmide CRISPR d'Activation (h) GLP-2R: sc-403966-ACT

GLP2R code le récepteur du peptide de type glucagon‑2 (GLP‑2R), un RCPG de classe B principalement exprimé dans les tissus intestinaux et entériques, où il détecte l’hormone incrétine GLP‑2. Après liaison du ligand, le GLP‑2R se couple surtout à Gs, augmentant l’AMPc et activant des programmes transcriptionnels associés à la PKA et à CREB, qui régulent la croissance épithéliale, l’intégrité de la barrière, l’absorption des nutriments et la réparation de la muqueuse. La signalisation en aval recoupe des voies contrôlant la survie et la prolifération cellulaires, notamment les processus liés à MAPK et à PI3K, contribuant à l’homéostasie intestinale et à la communication neuroendocrine. Une dérégulation de la signalisation de GLP2R a été étudiée dans des contextes d’inflammation gastro‑intestinale, de malabsorption et de remodelage épithélial altéré, étayant des recherches mécanistiques sur la fonction de barrière intestinale et la physiologie métabolique.

GLP-2R Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GLP2R sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GLP-2R Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GLP2R dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GLP2R, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GLP-2R. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GLP2R natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GLP-2R au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GLP-2R dans les cellules tumorales présentant une expression de GLP2R silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.