Plasmide CRISPR d'Activation (h) GIGYF2: sc-403602-ACT

GIGYF2 (GRB10-interacting GYF protein 2) est un facteur régulateur se liant à l’ARN qui couple la répression de la traduction au renouvellement des ARNm en s’associant à la machinerie de liaison à la coiffe et de dégradation. Par ses interactions avec 4EHP/EIF4E2, ZNF598 et d’autres facteurs de contrôle qualité apparentés, GIGYF2 contribue à la surveillance associée aux ribosomes, à la suppression des traductions aberrantes et au maintien de la protéostasie. Ces processus s’entrecroisent avec des voies de réponse au stress qui modulent les programmes d’expression génique lors de perturbations cellulaires. Des études génétiques et fonctionnelles ont relié une activité altérée de GIGYF2 à des phénotypes touchant la neurobiologie et l’homéostasie des protéines, ce qui en fait une cible pertinente pour des recherches mécanistiques sur la vulnérabilité neuronale et le contrôle de la traduction.

GIGYF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GIGYF2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GIGYF2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GIGYF2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GIGYF2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GIGYF2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GIGYF2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GIGYF2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GIGYF2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GIGYF2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.