Giantin Double Nickase Plasmid (h): sc-418145-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Giantin Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Giantin Double-Nickase-Plasmid (h) und Giantin Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GOLGB1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Giantin: sc-81279
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Giantin Double Nickase Plasmid (h) | sc-418145-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Giantin Double Nickase Plasmid (h2) | sc-418145-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GOLGB1 kodiert Giantin, ein großes, coiled-coil-haltiges Golgin, das an Golgi-Membranen verankert ist und zur Organisation der Golgi-Architektur beiträgt, indem es Transportvesikel einfängt und Tethering-Ereignisse koordiniert. Giantin unterstützt den Transport vom ER zum Golgi sowie den intragolgiären Transport, trägt zur Homöostase der Glykosylierung und des sekretorischen Weges bei und beeinflusst die räumliche Organisation von Golgi-Enzymen, die für die Proteinprozessierung erforderlich sind. Eine Störung der Golgin-Funktion, einschließlich der Giantin-abhängigen Aufrechterhaltung des Golgi, wird mit veränderter Sekretion der extrazellulären Matrix, Stressreaktionen im sekretorischen Weg sowie Phänotypen in Verbindung gebracht, die für Ziliogenese und Gewebemorphogenese relevant sind. Als Regulator von Struktur und Transport wird Giantin in zellbiologischen Studien zur Golgi-Integrität, Vesikeldynamik und Proteinreifung in menschlichen Zellen häufig verwendet.
Giantin Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GOLGB1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GOLGB1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GOLGB1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GOLGB1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.