GCNT3 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-411258-ACT
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- GCNT3 CRISPR Activationプラスミド (h)は、特異的に遺伝子の発現量を増加させるため、相乗的活性化メディエーター(SAM)転写活性化システムです。
- GCNT3 CRISPR Activationプラスミド (h)は、1:1:1の質量比で以下の3つのプラスミドがら成る：トランス活性化ドメインVP64に溶解する非活性化されたCas9 (dCas9)ヌクレアーゼ(D10A と H840A)をコード化したのプラスミド（ブラストサイジン耐性遺伝子を含めて）、MS2-p65-HSF1融合蛋白質をコード化したのプラスミド（ハイグロマイシン耐性遺伝子を含めて）、2つのMS2 RNAアプタマーに溶解する目標特異的な20ntガイドRNAをコード化したのプラスミド（ピューロマイシン耐性遺伝子を含めて）。
- 得られたSAM複合体は、部位特異的な約200-250nt転写開始点の上流の領域に結合し、転写因子の強いリクルートメントを提供し、遺伝子の高い活性化効果が得られます。
- GCNT3 CRISPR活性化プラスミド（h）およびGCNT3 CRISPR活性化プラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、GCNT3転写開始点の上流にある異なる調節領域を標的としています。いずれか一方、または両方のデザインが利用可能である可能性があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: GCNT3 抗体 (D-7): sc-398646
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
GCNT3 CRISPR Activationプラスミド (h) | sc-411258-ACT | 20 µg | $397.00 |
ヒトGCNT3（glucosaminyl（N-アセチル）transferase 3）は、ゴルジ体に局在する糖転移酵素をコードしており、ムチン型糖タンパク質上でコア2およびコア4構造の形成を触媒することで、O-グリカンを伸長させます。糖鎖分岐を再構築することにより、GCNT3は上皮分化、粘膜バリアの性質、ならびに糖タンパク質・糖脂質の認識に依存する細胞—細胞間／細胞—マトリックス間相互作用に影響を与えます。その活性は、受容体の安定性、輸送（トラフィッキング）、免疫認識を規定するO-糖鎖付加ネットワークと交差しており、接着や炎症性シグナル伝達を制御する経路とGCNT3を結び付けています。GCNT3の発現や糖鎖付加パターンの変化は、がんを含む複数の上皮性疾患の状況で報告されており、ムチンの糖鎖フォームの変化が浸潤、転移関連表現型、ならびに腫瘍—微小環境相互作用に影響し得ます。
GCNT3 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性GCNT3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。
GCNT3 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における GCNT3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。
標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はGCNT3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性GCNT3の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のGCNT3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるGCNT3依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびGCNT3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるGCNT3経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。