Plasmide Double Nickase (h) GC-C: sc-403413-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GC-C correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GC-C Double Nickase (h) et le plasmide GC-C Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GUCY2C. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GC-C Antibody (537): sc-100302
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GC-C | sc-403413-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GC-C | sc-403413-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GUCY2C code la guanylate cyclase C (GC-C), un récepteur transmembranaire qui convertit le GTP en cGMP en réponse à des ligands extracellulaires, régulant ainsi le transport ionique épithélial et l’homéostasie hydrique. La signalisation du cGMP induite par GC-C mobilise des effecteurs en aval tels que PKG et des phosphodiestérases modulées par le cGMP, afin de façonner le transport membranaire, la fonction barrière et les programmes d’état cellulaire dans les tissus muqueux. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GUCY2C ont été associées à une dérégulation de la physiologie épithéliale et sont étudiées dans le contexte des processus inflammatoires intestinaux et de la transformation épithéliale. En tant que récepteur épithélial associé à une lignée, GC-C est également utilisé comme outil moléculaire pour explorer des réponses de signalisation spécifiques des tissus et la biologie des marqueurs dans des modèles cellulaires humains.
GC-C Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GUCY2C dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GUCY2C. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GUCY2C. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GUCY2C.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.