gametogenetin Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-434015-ACT

O Ggn de camundongo codifica a gametogenetina, uma proteína enriquecida em células germinativas implicada na espermatogênese e em programas de diferenciação específicos dos testículos. Os padrões de expressão sugerem envolvimento na maturação pós-meiótica das células germinativas, com possíveis papéis na remodelação do citoesqueleto e em eventos de tráfego de proteínas que dão suporte ao desenvolvimento dos espermatozoides. A regulação alterada de fatores expressos na linhagem germinativa, como o Ggn, é frequentemente explorada para estudar vias que governam a fertilidade, a sobrevivência das células germinativas e o controle de genes do desenvolvimento. Em contextos de pesquisa biomédica, o Ggn serve como um marcador útil e como um nó funcional para dissecar redes transcricionais ativas na linhagem reprodutiva masculina.

gametogenetin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Ggn sem alterar a sequência de ADN subjacente.

gametogenetin O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Ggn em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Ggn, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de gametogenetin. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Ggn nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de gametogenetin no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via gametogenetin em células tumorais com expressão de Ggn silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.