Plasmide Double Nickase (h) GALT: sc-405717-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GALT correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GALT Double Nickase (h) et le plasmide GALT Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GALT. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: GALT Antibody (G-1): sc-365577
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GALT | sc-405717-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GALT | sc-405717-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène humain **GALT** code la galactose-1-phosphate uridylyltransférase, une enzyme cytosolique clé de la voie de Leloir qui convertit le galactose-1-phosphate et l’UDP-glucose en glucose-1-phosphate et UDP-galactose. Cette réaction permet de maintenir l’utilisation du galactose, soutient les réserves d’UDP-galactose nécessaires à la biosynthèse des glycoprotéines et des glycolipides, et contribue à préserver l’homéostasie métabolique cellulaire. Une altération de l’activité de GALT entraîne une accumulation toxique de galactose-1-phosphate et de métabolites apparentés, ce qui relie ce gène aux erreurs innées du métabolisme des glucides, telles que la galactosémie classique. Ainsi, GALT est largement étudié dans les réponses au stress métabolique, la vulnérabilité hépatique et neuronale, ainsi que la signalisation et le trafic dépendants des glycoconjugués.
GALT Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GALT dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GALT. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GALT. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GALT.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.