GALK1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405217

Übersicht

GALK1 kodiert Galaktokinase 1, ein zytosolisches Enzym, das die Phosphorylierung von α-D-Galaktose zu Galaktose-1-phosphat katalysiert und damit den Stofffluss durch den Leloir-Weg zur Galaktoseverwertung einleitet. Indem die GALK1-Aktivität den Eintritt von Galaktose in die Glykolyse sowie in Biosynthesewege von Glycokonjugaten steuert, trägt sie zum zellulären Energiestoffwechsel und zur Homöostase von Glykanen bei. Störungen der Galaktoseverarbeitung sind mit angeborenen Stoffwechseldefekten verknüpft, und eine veränderte Funktion des Leloir-Wegs kann in unterschiedlichen zellulären Kontexten oxidativen Stress sowie Metabolitentoxizität beeinflussen. GALK1 ist daher relevant für die Untersuchung des Kohlenhydratstoffwechsels, metabolischer Umprogrammierung und nachgelagerter Effekte auf die Glykolisierung von Proteinen und Lipiden.

Das GALK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des GALK1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des GALK1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von GALK1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die GALK1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von GALK1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der GALK1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf GALK1-Exone abzielen, die für die GALK1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere GALK1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom GALK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom GALK1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des GALK1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das GALK1 HDR-Plasmid (h) und GALK1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von GALK1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten GALK1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.